通常,如果懷疑細(xì)胞有支原體污染,可直接取細(xì)胞上清進(jìn)行支原體PCR檢測。因為存在支原體污染的細(xì)胞上清中,支原體密度為通常為106-108個/ml,已足以用于PCR檢測。Minverva公司生產(chǎn)的支原體PCR試劑盒靈敏度高,特異性好,檢測的支原體種類多,很受用戶的歡迎。但有時,支原體檢測前,還需對樣品中的支原體DNA進(jìn)行提取。那么,什么時候需要提取呢?
有如下幾種情況。如細(xì)胞培養(yǎng)液中存在抑制PCR的物質(zhì),這時就需要提取。細(xì)胞培養(yǎng)基中的血清濃度如果超過12%,那么對下游的PCR反應(yīng)會產(chǎn)生抑制。酚紅,對熒光定量PCR的檢測也會干擾。這些均可以通過使用Miverva公司的支原體DNA提取試劑盒來克服。對于樣品類型是細(xì)胞團、疫苗、凍存細(xì)胞和石蠟包埋的組織,也需要提前提取DNA。另外,如果樣品中蛋白含量高于10mg/ml,則先需要用蛋白酶K進(jìn)行處理。
Minerva公司生產(chǎn)的Venor®GeM Sample Preparation Kit可從細(xì)胞上清和生物制品中分離支原體DNA,全程只需30分鐘。分四步組成:細(xì)胞溶解,DNA特異性與層析柱結(jié)合,祛除殘留的污染物和抑制劑,洗脫DNA。該試劑盒符合歐洲藥典規(guī)范。