細(xì)胞培養(yǎng)是一種無(wú)菌操作技術(shù)，需要保護(hù)工作環(huán)境和條件免受微生物污染和其他不良因素的影響。其實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的原理是防止微生物污染和不良因素，需要潔凈的工作環(huán)境，新鮮空氣，干燥和無(wú)煙無(wú)塵。細(xì)胞培養(yǎng)室的設(shè)計(jì)原理一般是無(wú)菌操作區(qū)設(shè)計(jì)在室內(nèi)活動(dòng)較少的內(nèi)側(cè)，常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)在一個(gè)房間，進(jìn)行洗滌和消毒在另一個(gè)房間里。

一.無(wú)菌操作區(qū)

（1）無(wú)菌操作區(qū)域：無(wú)菌操作區(qū)域僅限于細(xì)胞培養(yǎng)和其他無(wú)菌操作區(qū)域，最好與外界隔離，不能穿行或受其他干擾。

理想的無(wú)菌操作室應(yīng)分為三個(gè)部分：

a）更衣室——更換衣服、鞋子，穿戴帽子和面具。

b）緩沖室 -——位于更衣室和手術(shù)室之間，以確保手術(shù)室內(nèi)的無(wú)菌環(huán)境，并放置恒溫培養(yǎng)箱和一些必要的小器械。

c）無(wú)菌手術(shù)室——專(zhuān)用于無(wú)菌處理、細(xì)胞培養(yǎng)。房間大小應(yīng)適當(dāng)，頂部不宜過(guò)高（不超過(guò)2.5m），以確保紫外線(xiàn)的有效殺菌 效果；墻壁光滑，*，方便清潔和消毒。工作臺(tái)不應(yīng)靠墻放置。臺(tái)面要平滑壓塑作表面，涂漆成白色或灰色，以便于觀 察解剖結(jié)構(gòu)和酚紅。

（2）凈化工作臺(tái)：操作簡(jiǎn)單，安裝方便，占用空間小，凈化效果好。在一般細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室中主要使用的兩種的凈化工作臺(tái)：

a）側(cè)流或垂直式

b）外流或水平層流式。

二.孵化區(qū)

盡管該區(qū)域?qū)o(wú)菌的要求并不比無(wú)菌區(qū)域嚴(yán)格，但它們?nèi)匀恍枰鍧崯o(wú)塵，因此它們也應(yīng)放置在干擾少的區(qū)域。孵育可以在培養(yǎng)箱中或控制溫度的溫室中進(jìn)行，相比之下溫室是費(fèi)用較高，通常實(shí)驗(yàn)室多采用培養(yǎng)箱孵育。

三.制備區(qū)

在該區(qū)域中，主要進(jìn)行培養(yǎng)液，有關(guān)培養(yǎng)用液等實(shí)驗(yàn)用品的制備。

四.存儲(chǔ)區(qū)域

主要存放各種冰箱、干燥箱、液氮罐、無(wú)菌培養(yǎng)液、培養(yǎng)瓶等，此環(huán)境還需要清潔無(wú)塵。

五.清潔和消毒區(qū)域

清潔和消毒區(qū)域應(yīng)與其他區(qū)域分開(kāi)，主要用于清潔所有細(xì)胞培養(yǎng)容器、準(zhǔn)備、消毒及三蒸水制造等。

細(xì)胞培養(yǎng)溫度
維持培養(yǎng)細(xì)胞旺盛生長(zhǎng)，必須有恒定而適宜的溫度。不同種類(lèi)的細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)溫度要求也不同。
人體細(xì)胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)溫度為36.5±0.5，偏離這一溫度范圍，細(xì)胞的正常代謝會(huì)受到影響，甚至死亡。
培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)低溫的耐受力較對(duì)高溫強(qiáng)，溫度上升不超過(guò)39時(shí)，細(xì)胞代謝與溫度成正比；人體細(xì)胞在39-401小時(shí)，即能受到一定損傷，但仍有可能恢復(fù)；在40-411小時(shí)，細(xì)胞會(huì)普遍受到損傷，僅小半數(shù)有可能恢復(fù)；41-421小時(shí)，細(xì)胞受到嚴(yán)重?fù)p傷，大部分細(xì)胞死亡，個(gè)別細(xì)胞仍有恢復(fù)可能；當(dāng)溫度在43以上1小時(shí)，細(xì)胞全部死亡。
相反，溫度不低于0時(shí)，對(duì)細(xì)胞代謝雖有影響，,但并無(wú)傷害作用；把細(xì)胞放入25-35時(shí)，細(xì)胞仍能生存和生長(zhǎng)，但速度減慢；放在4數(shù)小時(shí)后，再回到37培養(yǎng)，細(xì)胞仍能繼續(xù)生長(zhǎng)。
細(xì)胞代謝隨溫度降低而減慢。當(dāng)溫度降至冰點(diǎn)以下時(shí)，細(xì)胞可因胞質(zhì)結(jié)冰受損而死亡。但是，如果向培養(yǎng)液中加入一定量的冷凍保護(hù)劑(二甲亞砜或甘油)，可在深低溫下如-80或-196(液氮)長(zhǎng)期保存。
合適的氣體環(huán)境
氣體是哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)生存必需條件之一，所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。
氧氣參與三羧酸循環(huán)，產(chǎn)生供給細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的能量和合成細(xì)胞生長(zhǎng)所需用的各種成分。
開(kāi)放培養(yǎng)時(shí)一般把細(xì)胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環(huán)境中。二氧化碳既是細(xì)胞代謝產(chǎn)物，也是細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖所需成分，它在細(xì)胞培養(yǎng)中的主要作用在于維持培養(yǎng)基的pH值。
大多數(shù)細(xì)胞的適宜pH為7.2-7.4，偏離這一范圍對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)將產(chǎn)生有害的影響。但細(xì)胞耐酸性比耐堿性大一些，在偏酸環(huán)境中更利于細(xì)胞生長(zhǎng)。但有一些細(xì)胞也喜歡偏堿環(huán)境中生長(zhǎng)，如成纖維細(xì)胞適合pH是7.4-7.6。每種細(xì)胞都有其最適pH值。

在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，支原體感染發(fā)生率達(dá)到63%，因而細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中被支原體污染是一個(gè)世界性的難題。細(xì)胞培養(yǎng)中常遇見(jiàn)的有細(xì)菌污染、真菌污染、支原體污染、病毒污染等。說(shuō)起支原體污染，估計(jì)細(xì)胞培養(yǎng)的同學(xué)就開(kāi)始犯愁了，細(xì)胞培養(yǎng)的老手都知道，支原體污染非常不易察覺(jué)。有的實(shí)驗(yàn)室被支原體污染后，如果不進(jìn)行有效*的支原體清除，該實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞培養(yǎng)很難進(jìn)行下去，細(xì)胞傳代3代以后狀態(tài)就急劇下滑，無(wú)法進(jìn)行正常實(shí)驗(yàn)，有的實(shí)驗(yàn)室甚至只能指望換細(xì)胞間。那么怎樣才能有效檢測(cè)并清除支原體污染呢?

有沒(méi)有什么方法能夠簡(jiǎn)單高效地祛除DNA污染呢？

當(dāng)然有：Minerva Biolabs PCR Clean™

通過(guò)中和以及降解的原理，可快速有效地祛除任何物體表面的DNA、RNA以及DNA酶、RNA酶的污染，使它們快速的降解，從而確保PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確。

使用方法也十分簡(jiǎn)單：

將PCR Clean™噴在操作臺(tái)表面，反應(yīng)1分鐘后，即可用干凈紙巾擦干試劑。

注：如果沒(méi)有擦拭干凈，液體揮發(fā)后表面可能有白色殘留，影響美觀。此時(shí)可用噴壺噴灑蒸餾水到白色殘留處，然后擦拭即可。

針對(duì)移液器需要去除DNA污染，可按照說(shuō)明書(shū)拆開(kāi)移液器，將桿軸浸泡在PCR Clean™噴霧劑中，1分鐘后取出后用水沖洗，晾干，重新組合。