培養(yǎng)細胞生命期(Life Span of Culture Cells):所謂培養(yǎng)細胞生命期,是指細胞在培養(yǎng)中持續(xù)增殖和生長的時間。體內(nèi)組織細胞的生存期與完整機體的死亡衰老基本相一致。人胚二倍體成纖維細胞培養(yǎng),在不凍存和反復(fù)傳代條件下,可傳30~50代,相當(dāng)于150~300個細胞增殖周期,能維待一年左右的生存時間,最后衰老凋亡(Apoptosis)。如供體為成體或衰老個體,則生存時間較短;如培養(yǎng)的為其它細胞,如肝細胞或腎細胞,生存時間更短,僅能傳幾代或十幾代。只有當(dāng)細胞發(fā)生遺傳性改變,如獲永生性或惡性轉(zhuǎn)化時,細胞的生存期才可能發(fā)生改變。正常細胞培養(yǎng)時,不論細胞的種類和供體的年齡如何,在細胞全生存過程中,大致都經(jīng)歷以下三個階段:
1、原代培養(yǎng)(Primary Culture)期:也稱初代培養(yǎng),即從體內(nèi)取出組織接種培養(yǎng)到第一次傳代階段,一般持續(xù)1一4周。此期細胞呈活躍的移動,可見細胞分裂,但不旺盛。初代培養(yǎng)細胞與體內(nèi)原組織在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動上相似性大。細胞群是異質(zhì)的(Heterogeneous),也即各細胞的遺傳性狀互不相同,細胞相互依存性強。
2、傳代期:初代培養(yǎng)細胞一經(jīng)傳代后便改稱做細胞系(Cell Line)。在全生命期中此期的持續(xù)時間最長。在培養(yǎng)條件較好情況下,細胞增殖旺盛,并能維持二倍體核型,呈二倍體核型的細胞稱二倍體細胞系(Diploid Cell Line)。為保持二倍體細胞性質(zhì),細胞應(yīng)在初代培養(yǎng)期或傳代后早期凍存。當(dāng)前世界上常用細胞均在不出十代內(nèi)凍存。如不凍存,則需反復(fù)傳代以維持細胞的適宜密度,以利于生存。但這樣就有可能導(dǎo)致細胞失掉二倍體性質(zhì)或發(fā)生轉(zhuǎn)化。一般情況下當(dāng)傳代10~50次左右,細胞增殖逐漸緩慢,以至*停止,細胞進入第三期。
3、衰退期:此期細胞仍然生存,但增殖很慢或不增殖;細胞形態(tài)輪廓增強,最后衰退凋亡。
在細胞生命期階段,少數(shù)情況下,在以上三期任何一點(多發(fā)生在傳代末或衰退期),由于某種因素的影響,細胞可能發(fā)生自發(fā)轉(zhuǎn)化(Spontaneous Transformation)。轉(zhuǎn)化的標(biāo)志之一是細胞可能獲得永生性(Immortality)或惡性性(Malignancy)。細胞永生性也稱不死性,即細胞獲持久性增殖能力,這樣的細胞群體稱無限細胞系(Infinite Cell Line),也稱連續(xù)細胞系(Continuous Cell Line)。無限細胞系的形成主要發(fā)生在第二期末,或第三期初階段。細胞獲不死性后,核型大多變成異倍體(Heteroploid)。細胞轉(zhuǎn)化亦可用人工方法誘發(fā),轉(zhuǎn)化后的細胞也可能具有惡性性質(zhì)。細胞永生性和惡性性非同一性狀。
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