霍亂是一種古老且流行廣泛的烈性傳染病之一,屬于檢疫傳染病,曾在世界上引起多次大流行?;魜y弧菌是該病的病原體,學(xué)名V.cholera,屬弧菌科,是一種革蘭氏陰性菌。
人類在自然情況下是霍亂弧菌的主要易感者,通過污染的水源或飲食物經(jīng)口傳染。在一定條件下,霍亂弧菌進(jìn)入小腸后,依靠鞭毛的運(yùn)動(dòng),穿過粘膜表面的粘液層,可能藉菌毛作用粘附于腸壁上皮細(xì)胞上,在腸粘膜表面迅速繁殖,經(jīng)過短暫的潛伏期后便急驟發(fā)病。該菌不侵入腸上皮細(xì)胞和腸腺,也不侵入血流,僅在局部繁殖和產(chǎn)生霍亂腸毒素,此毒素作用于不粘膜上皮細(xì)胞與腸腺使腸液過度分泌,從而患者出現(xiàn)上吐下瀉,瀉出物呈“米泔水樣”并含大量弧菌,此為本病典型的特征。
霍亂弧菌分離與鑒定方法
生化鑒定
生化鑒定前,先分離霍亂弧菌,通常情況下,霍亂弧菌在TCBS培養(yǎng)基上典型霍亂弧菌菌落為黃色,扁平,真徑 2-3 mm;副溶血弧菌菌落呈圓形,邊緣整齊、濕潤(rùn)、稍混濁、半透明,多數(shù)具尖心、斗笠狀,藍(lán)綠色菌落,直徑2-4 mm。
但傳統(tǒng)TCBS培養(yǎng)基上的其他的蔗糖發(fā)酵菌會(huì)影響TCBS瓊脂上弧菌的鑒定,影響檢測(cè)結(jié)果?;蜻x用顯色培養(yǎng)基分離,締一生物為您推薦HiMedia公司(微生物公司)的HiCrome弧菌顯色培養(yǎng)基(貨號(hào):MV1682),在該培養(yǎng)基上細(xì)菌β-半乳糖苷酶和培養(yǎng)基中所包含底物發(fā)生反應(yīng),使霍亂弧菌呈現(xiàn)紫色菌落;同時(shí)可以分離出副溶血性弧菌,呈現(xiàn)藍(lán)綠色菌落,可初步確認(rèn)副溶血性弧菌和霍亂弧菌的存在。
可選用HiMedia公司HiBio-IDTM弧菌生化鑒定卡(貨號(hào):KB007), 12種生化反應(yīng):
1 | 伏普試驗(yàn) |
2 | 精氨酸脫羧試驗(yàn) |
3 | 鹽耐量試驗(yàn)(1%) |
4 | ONPG試驗(yàn) |
5 | 檸檬酸鹽利用試驗(yàn) |
6 | 鳥氨酸脫羧試驗(yàn) |
7 | 甘露醇發(fā)酵試驗(yàn) |
8 | 阿拉伯糖發(fā)酵試驗(yàn) |
9 | 蔗糖發(fā)酵試驗(yàn) |
10 | 葡萄糖發(fā)酵試驗(yàn) |
11 | 水楊苷發(fā)酵試驗(yàn) |
12 | 纖維二糖發(fā)酵試驗(yàn) |
特點(diǎn):
△操作簡(jiǎn)單,省時(shí)省力
△省心,所需試劑都包含在試劑盒中
△率,一次孵育即出結(jié)果
△實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠
2.血清凝集法
根據(jù)弧菌O抗原不同,分成Ⅵ個(gè)血清群,第Ⅰ群包括霍亂弧菌的兩個(gè)生物型。第Ⅰ群A、B、C三種抗原成份可將霍亂弧菌分為三個(gè)血清型:含AC者為原型(又稱稻葉型),含AB者為異型(又稱小川型),A、B、C均有者稱中間型(彥島型)。
1992年10月在印度東南部又發(fā)現(xiàn)了一個(gè)引起霍亂流行的新血清型菌株(0139),它引起的霍亂在臨床表現(xiàn)及傳播方式上與古典型霍亂*相同,但不能被01群霍亂弧菌診斷血清所凝集,抗01群的抗血清對(duì)0139菌株無保護(hù)性免疫。在水中的存活時(shí)間較01群霍亂弧菌長(zhǎng),因而有可能成為引起世界性霍亂流行的新菌株。
3.核酸擴(kuò)增法
核酸擴(kuò)增兩端,然后在體外模擬DNA體內(nèi)復(fù)制的過程反復(fù)擴(kuò)增,使靶序列放大上萬倍甚至上百萬倍而被檢測(cè)出來。技術(shù),即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chainreaction,PCR),其基本原理是設(shè)計(jì)、合成兩條寡核苷酸,作為引物,對(duì)應(yīng)于待測(cè)病原微生物某一段特異性序列。
由霍亂弧菌引起的霍亂疾病,對(duì)人類健康危害很大,有效的檢測(cè)鑒定出霍亂弧菌對(duì)人類健康有著重要意義。
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